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色譜柱高pH不耐受?看AlphaHybrid C18如何輕松應(yīng)對堿性條件分析方法

發(fā)布時間:2024-12-18 來源:


硅膠顆粒在高pH條件下的溶解問題


硅膠作為高效液相色譜柱的填料基質(zhì),盡管被廣泛采用,但其性能并非完美無缺,存在一些固有的缺陷。通常認(rèn)為,當(dāng)硅膠填料長時間持續(xù)暴露在pH>8的環(huán)境中,硅膠骨架可能會發(fā)生溶解,這種溶解現(xiàn)象會導(dǎo)致柱效顯著下降,峰形變差,保留時間縮短等問題,進而影響分析實驗的正常進行。
目前,關(guān)于硅膠填料在高pH條件下?lián)p壞的機理已有較為普遍的認(rèn)識,如圖1所示,即氫氧根離子(OH-)攻擊硅膠骨架中的硅氧鍵,釋放出原硅酸。隨著硅膠顆?;w的溶解,孔洞逐漸形成,這些孔洞的累積最終可能導(dǎo)致柱床的塌陷,從而嚴(yán)重影響色譜柱的性能。

圖1 硅膠骨架溶解過程


然而某些樣品的分析在堿性條件下具有更好的分離效果和分析效率,甚至某些化合物在堿性條件下才穩(wěn)定,如何應(yīng)對高pH條件下的色譜分析呢?

雜化硅膠顆粒解決高pH條件分析難題

為了克服純硅膠基質(zhì)填料的局限性,華譜科儀研發(fā)團隊推出技術(shù)創(chuàng)新的雜化硅膠顆粒。這種雜化硅膠顆粒通過在硅氧骨架中引入亞乙基橋結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)中Si-C鍵具有更高的化學(xué)穩(wěn)定性,且完全釋放出一個亞乙基橋單元,需要破壞6個硅氧鍵,這使得雜化硅膠顆粒在高pH條件下具有更高的耐受性。

圖2 雜化硅膠骨架結(jié)構(gòu)


華譜科儀研發(fā)團隊以最新研發(fā)的雜化顆粒為載體,結(jié)合特有的鍵合技術(shù)和表面修飾,隆重推出AlphaHybrid C18產(chǎn)品。該產(chǎn)品將pH耐受范圍拓寬至12,突破了反相色譜柱在高pH條件下的應(yīng)用限制,為方法開發(fā)、分析檢測帶來新的選擇!
對AlphaHybrid C18耐堿性進行考察,AlphaHybrid C18在50 mM的三乙胺(pH=10)、柱溫50℃的條件下共經(jīng)過300 h,柱效依然保持在80%以上。

圖3 AlphaHybrid C18耐堿性能測試


AlphaHybrid C18色譜柱應(yīng)對堿性色譜條件分析案例

以下展示采用AlphaHybrid C18色譜柱在堿性流動相條件下測試的化藥案例,分別為:阿奇霉素、氯氮平和β受體阻斷劑。

案例一阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)分析
阿奇霉素目前中國藥典(ChP)、美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)均采用HPLC法進行有關(guān)物質(zhì)的分析,其中ChP規(guī)定的流動相 pH 值為8.2,USP和EP規(guī)定的流動相 pH 值為8.9,這就要求實驗所用色譜柱需要具有良好的耐堿性能。
本實驗參照歐洲藥典(EP)方法,采用 AlphaHybrid C18, 4.6×250 mm, 5 μm色譜柱對阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)項下系統(tǒng)適用性及峰鑒別溶液進行分離,實現(xiàn)阿奇霉素和13種雜質(zhì)的良好分離。
色譜條件
儀   器:華譜科儀S6000高效液相色譜儀;
色譜柱:AlphaHybrid C18, 4.6×250 mm, 5  μm;
流動相:A_1.8 g/L磷酸氫二鈉溶液(pH=8.9),B_甲醇:乙腈=25:75;
流   速:1.0 mL/min;
進樣量:50 μL;
柱   溫:65℃;
檢測器:UV@210 nm;
梯   度:

實驗結(jié)果


圖4  阿奇霉素系統(tǒng)適用性溶液

表1  阿奇霉素系統(tǒng)適用性結(jié)果


圖5  阿奇霉素峰鑒別溶液

表2 阿奇霉素峰鑒別結(jié)果


案例二氯氮平及雜質(zhì)分析

本實驗參照2020版《中國藥典》氯氮平有關(guān)物質(zhì)的液相分析方法,采用AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5 μm色譜柱對氯氮平及四種氯氮平雜質(zhì)進行分離分析,分離性能良好。
色譜條件
儀   器:華譜科儀S6000高效液相色譜儀;
色譜柱:AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5  μm;
流動相:甲醇:0.4%三乙胺-水=70:30;
流   速:1.0 mL/min;
進樣量:10 μL;
柱   溫:30 ℃;

檢測器:UV@257 nm.


實驗結(jié)果


(峰1_氯氮平雜質(zhì)A;峰2_氯氮平雜質(zhì)D;峰3_氯氮平雜質(zhì)C;峰4_氯氮平;峰5_氯氮平雜質(zhì)B;)

圖6 氯氮平測試結(jié)果色譜圖

表3氯氮平測試結(jié)果

案例三7種β受體阻斷劑分離

采用AlphaHybrid C18,4.6×150 mm,5 μm色譜柱,對包括索他洛爾、阿替洛爾、拉貝洛爾、吲哚洛爾、美托洛爾、比索洛爾、普萘洛爾在內(nèi)的7種β受體阻斷劑進行分離測試,實現(xiàn)了良好分離。


色譜條件
儀   器:華譜科儀S6000高效液相色譜儀;
色譜柱:AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5  μm;
流動相:A:10 mM碳酸氫銨(pH=10.5);B:乙腈;
流   速:1.0 mL/min;
進樣量:10 μL;
柱   溫:30 ℃;
檢測器:UV@230 nm;
梯   度:

實驗結(jié)果


峰1_索他洛爾;峰2_阿替洛爾;峰3_拉貝洛爾(非對映異構(gòu)對);峰4_吲哚洛爾;峰5_美托洛爾;峰6_比索洛爾;峰7_普萘洛爾;)
圖 7 β受體阻斷劑測試結(jié)果色譜圖

表4 β受體阻斷劑測試結(jié)果


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